Aleli Salazar-Ramiro, Norma Y HernándezPedro, Edgar Rangel-Lopez, Vernica Pérez
de la Cruz, Sergio Estrada-Parra, Benjamin Pineda.
Аннотация
В 1955 году Лоуренс обнаружил, что диализ жизнеспособных лейкоцитов, полученных от
здорового донора с положительным чрескожным туберкулиновым тестом, способен передавать здоровому рецептору способность реагировать на этот патоген. Лоуренс назвал эти молекулы Трансфер Фактором (ТФ). ТФ состоит из пептидов, полученных из лимфоцитов, с молекулярной массой от 3500 до 6000 кДа. Т-лимфоциты обладают способностью вызывать гиперчувствительность замедленного типа и клеточный иммунитет от сенсибилизированных доноров к неиммунным реципиентам. ТФ играет жизненно важную роль в контроле иммунных реакций и нецелевых ответов при развитии аутоиммунных реакций. ТФ улучшает клеточный иммунитет у пациентов с иммунодефицитом, поскольку их ответы опосредованы антигенспецифическими, индукторными и супрессорными/регуляторными свойствами, содержащимися в этой
фракции.
Кроме того, было отмечено, что мутагенная активность всего ТФ и супрессорная активность в отношении активации мутагена в ТФ содержатся во фракции I.
Фракция II оказывает прямое индуцирующее хемилюминесценцию (ХЛ) действие на нестимулированные клетки и увеличивает ХЛ фагоцитов.
Фракция III содержит компоненты, ответственные за усиление реакций на фитогемагглютинин (ФГА) и мутаген фитолакка (ФМВ).
Антигенспецифические фракции способствуют более быстрому распознаванию и запоминанию патогенных организмов. ТФ также индуцирует антигенный стимул, тогда как супрессорная фракция действует, высвобождая ИЛ-10, ингибирующий цитокин из Th2-клеток.
Следовательно, ТФ можно рассматривать как новый подход в терапии повышения иммунитета при раке.
Ключевые слова: фактор переноса, иммунный ответ, рак; иммунотерапия, иммуномодулятор
Диализируемый лейкоцитарный экстракт (ДЛЭ) – это экстракт, полученный из иммунных лимфоцитов, способных переносить антигенспецифическую информацию для клеточно-опосредованного иммунитета (КОИ) от иммунизированного донора к интактному реципиенту. Эти продукты, также называемые трансфер-факторами (ТФ), представляют собой пептиды с молекулярной массой 3500–6000 кДа;
светло-желтая жидкость с pH 6,5–7,0, состоящая из олигорибонуклеотидов, присоединенных к пептидной молекуле, которая присутствует во всех организмах животных.
Благодаря небольшому размеру ТФ может действовать как иммуномодулятор, обеспечивая криофильные свойства. ТФ термолабилен, но обладает высокой стабильностью при низких температурах. ТФ может храниться годами при температуре от -20°C до -70°C. В 1955 году Лоуренс показал, что ТФ, несущий антигенную специфичность донора, может быть получен из лимфоцитов наивного реципиента, которому ранее был введен ТФ донора. Лимфоциты реципиента действуют как эффективный копировщик, интегрируя специфичность введенного ТФ, и реципиент ТФ, таким образом, становится эффективным донором.
Лоуренс предположил, что этот адаптивный перенос иммунитета был обусловлен молекулами с молекулярной массой менее 12 кДа. (1,2)
После этого Лоуренс провел новые эксперименты с использованием лизатов лейкоцитов крови доноров, у которых была положительная реакция гиперчувствительности замедленного типа на такие антигены, как туберкулин (PPD), дифтерийный анатоксин, стрептококковый белок М или кокцидиоидин.
Кожные пробы реципиентов изначально были отрицательными на тестируемые антигены.
Через несколько часов после введения трансфер-фактора реципиенты способны проявлять замедленную гиперчувствительность к антигенам, к которым доноры были реактивны.(3)
ТФ имеют высокий уровень остатков тирозина и лизина со значительным сходством с N-концевыми участками некоторых нейропептидов,
таких как те, что относятся к семейству энцефалинов.(4) В целом, все исследованные ТФ были очень эффективными факторами для коррекции или усиления ответов на ХМИ, а также для проявления антигенспецифического ответа.(5–7)
В 2000 году Киркпатрик получил определенный ТФ путем иммунизации мышей и коров овальбумином, гликопротеином D вируса простого герпеса и переноса. Он смог очистить
специфический ТФ для каждого из этих антигенов, обладающий способностью передавать
клеточный ответ специфическим образом, оцениваемым по клеточно-опосредованному
иммунитету или гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) при воздействии
этих антигенов.
При анализе последовательностей пептидов была обнаружена консенсусная последовательность MXLLYADQDL/VEDN. Однако при проверке биологического эффекта этой синтетической последовательности она не смогла передать специфический тип ответа DTH, но блокировала перенос специфического ТФ, что предполагает, что эта последовательность связывается с рецептором ТФ.(8)
Экстракт ТФ обладает несколькими биологическими свойствами. Некоторые фракции ТФ были разделены жидкостной хроматографией низкого давления, электрофорезом и ферментативными методами.(9–11) Вкратце, кровь собирают у людей, ранее контактировавших с больным. Эта кровь была взята на ионообменную колонку. Надосадочную плазму и лейкоциты удаляли с помощью плазмоэкстрактора в пакет для переноса и центрифугировали в пакете, а клетки лизировали в стерильных условиях. Фактор переноса был выделен диафильтрациейи концентрировали методом тангенциальной ультрафильтрации.(12)
Наконец, ТФ был получен, когда лейкоциты размораживали при комнатной температуре, а диализат лиофилизировали. Поскольку ТФ еще не был охарактеризован химически, препараты были исследованы на общее содержание твердых веществ, золы, биурет-положительного материала и азота, а также подвергнуты спектрофотометрическому анализу для обеспечения некоторой однородности. С помощью гель-диффузии против антител, направленных против цельной сыворотки человека, было установлено, что препарат не содержит плазменных белков.
Диализационную жидкость пропускали через фильтр с размером пор 22 мкм и хранили
замороженной в стерильных флаконах до использования.
Были проведены исследования для определения фракции, которая оказывает свое действие на клетки. Модифицировав условия хроматографии на сефадексе G-25, были разделены две фракции, IIIa и IIb. Активность этих двух фракций in vivo указывает на то, что только фракция IIIa, полученная от доноров с положительным антигеном, была способна передавать положительную кожную реактивность.
В то время как фракция IIlb сама по себе вызывала значительную антигеннезависимую кожную реактивность.(13) С другой стороны, при нанесении ТФ на разделительные колонки с сефадексом G-10 были получены два компонента, названные фракциями «L» и «S». L была недиализируемой субфракцией, а фракция S содержала 85% от
общего количества полипептидов, включая антигеннезависимый воспалительный
компонент. Введение этой фракции пациентам вызывало внутрикожную реакцию и перваскулярные инфильтраты мононуклеарных клеток вокруг кровеносных сосудов.(14)
В этом исследовании определялась эффективность МТТ-теста для выявления бактерицидного или бактериостатического действия bDLE и «S», что подтверждено другими авторами.(15)
В этом исследовании антибактериальные эффекты фракций «L», I, II, III и IV не были обнаружены, вероятно, из-за присутствия других веществ, ингибирующих рост бактерий, отсутствия протестированных комбинаций фракций I, II, III и IV, или обеих ситуаций. Эти результаты показали выдающееся антибактериальное свойство bDLE in vitro против нескольких патогенных бактерий, независимо от иммунной системы, и его потенциал в качестве антибактериального агента может быть подтвержден дальнейшими исследованиями in vivo.(16)
Мутагенная активность всего ТФ и подавляющая активность в отношении активации мутагена в присутствии ТФ были обнаружены во фракции I.
Фракция III содержала компоненты, ответственные за усиление ФГА- и PWM-ответов. Кроме того, во фракции III был обнаружен компонент, ответственный за усиление антиген-зависимой трансформации лимфоцитов.
Фракция IV подавляла
антиген-индуцированную трансформацию лимфоцитов. Было обнаружено, что только
фракции II оказывала прямое индуцирующее действие на ХЛ на нестимулированных
клетках. Фракция II дополнительно увеличивала ХЛ фагоцитов,
стимулированных зимозаном (маннозимом). Фракции I и III оказались
неэффективными, что позволяет предположить, что стимуляция фагоцитов периферической крови
олигопептидами фракции II может играть важную
роль. Исследования по определению эффектов диализируемых лейкоцитар-
ных экстрактов (что отражается на восстановлении способности к E-розеткообразованию
трипсинизированных лимфоцитов) позволили предположить следующее:
Диализируемые лейкоцитар-
ные экстракты содержат ингибитор с молекулярной
массой около 5000 (фракция I). Этот ингибитор существенно влияет
на иммунологическую активность как целых препаратов, так и их различных
фракций при анализе активности in vitro. Иммунологическая активность
сосредоточена во фракциях III и IV. Только активность фракции III может быть
значительно снижена инактивацией. Активность фракции II индуцируется
неполным отделением от фракции III. В то же время фракция IV
не может быть инактивирована.17
Очистка ТФ методом хроматографии была достигнута путем
фракционирования экстракта гиперчувствительных клеток. Клеточные супернатанты
Источники: